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Biochemistry

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Enzymes

Question
14 out of 79
 

Electrophoresis done under pH gradient is



A Iso-osmotic
B Isoelectric

C Ion exchange
D None

Ans. B Isoelectric pH

High voltage Electrophoresis ( Isoelectric) Protein move under the influence of applied current as primary gradient in the presence of secondary gradient pH (= Isoelectric focusing)

Two-Dimensional Electrophoresis

1. Well suited for separating the components of complex mixtures of protein

2. IEF (isoelectric focusing) is used in conjunction with SDS-PAGE, which separate polypeptides based on PI (isoelectric point) in one dimension and based on Mr in the second.

a. Isoelectric focusing (IEF) Ionic buffers called ampholytes and an applied electric field are used to generate a pH gradient with a polyacrylic amide mixture. Applied proteins migrate until they reach the region of the matrix where the pH matches their isoelectric point (p1), the pH at which a peptide’s net charge is zero.

b. SDS-PAGE (=Sodium dodecyl sulphate — polyacrylamide gel electrophoresis)

c. Most widely used method for determining the purity of protein (recombinant protein)

d. Gel was stained with Coomassie blue.

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